| تعداد نشریات | 284 |
| تعداد نشریات سازمان | 82 |
| تعداد شماره‌ها | 3,037 |
| تعداد مقالات | 33,984 |
| تعداد مشاهده مقاله | 45,779,201 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 77,192,383 |
Fusion of Clostridium perfringens type D and B epsilon and beta toxin genes and it’s cloning in E. coli | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقاله 1، دوره 66، شماره 1، شهریور 2011، صفحه 1-10 اصل مقاله (336.23 K) | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2016.103859 | ||
| نویسندگان | ||
| R. Pilehchian Langroudi1؛ K. Aghaei Pour2؛ M. Shamsara3؛ A.R. Jabbari4؛ G.R. Habibi5؛ H. Goudarzi6؛ S.A. Ghorashi* 3 | ||
| 1Department of molecular genetics, National institute of genetic engineering and biotechnology, Tehran, Iran & Department of anaerobic bacterial vaccine research & production, Razi vaccine and serum research institute, Karaj, Iran | ||
| 2Department of biotechnology, Razi vaccine and serum research institute, Karaj, Iran | ||
| 3Department of molecular genetics, National institute of genetic engineering and biotechnology, Tehran, Iran | ||
| 4Department of anaerobic bacterial vaccine research & production, Razi vaccine and serum research institute, Karaj, Iran | ||
| 5Department of protozoology & protozoal vaccine production, Razi vaccine and serum research institute, Karaj, Iran | ||
| 6Department of Avian diseases, Razi vaccine and serum research institute, Karaj, Iran | ||
| چکیده | ||
| Designing and producing a proper fusion construction is the most important problem of producing large quantities of a properly folded functional protein. This construction should have all necessary components of a real gene. A good designed fusion gene construction could be cloned into a good and suitable host. Clostridium perfringens is an important pathogen of humans and livestock and produces numerous toxins including epsilon and beta which are responsible for severe diseases. In the present study a new construction containing Clostridium perfringens type D epsilon toxin gene and type B beta toxin gene was designed. At the first step two pairs of primers were used for these genes amplification. At the next step epsilon forward and beta reveres primers were used to produce a chimeric gene containing amplified partial cds of etxD and partial cds of cpbB which are linked together by the AEAAAKEAAAKA fragment as a small linker. The method was based on fusion PCR and using of Pfu DNA polymerase, which has a proofreading activity. The fusion gene inserted into pJET1.2blunt and cloned into E.coli strain TOP10. Based on the latest information, this is the first design and cloning of epsilon-beta fusion gene and also this is the first time that PCR fusion strategy is used for Clostriadial gene fusion, which could be used for development of a recombinant epsilon-beta fusion protein vaccine. This construction also could serve as a model for development and production of novel fusion protein for other potential proteins and toxins. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| Clostridium perfringens؛ epsilon toxin؛ beta toxin؛ Cloning؛ fusion PCR | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| فیوژن ژن‌های توکسین اپسیلون و بتا کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ Dو B و کلونینگ آن در E.coli | ||
| نویسندگان [English] | ||
| رضا پیله چیان لنگرودی1؛ خسرو آقائی پور2؛ مهدی شمس آرا3؛ احمدرضا جباری4؛ غلامرضا حبیبی5؛ حسین گودرزی6؛ سید علی قریشی3 | ||
| 1بخش ژنتیک ملکولی دام و آبزیان, پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری, تهران, ایران و بخش تحقیق و تولید واکسن‌های بی‌هوازی, موسسه تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی، کرج، ایران | ||
| 2بخش بیوتکنولوژی، موسسه تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی، کرج، ایران | ||
| 3بخش ژنتیک ملکولی دام و آبزیان, پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری, تهران, ایران | ||
| 4بخش تحقیق و تولید واکسن‌های بی‌هوازی, موسسه تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی، کرج، ایران | ||
| 5خش تک یاخته شناسی، موسسه تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی، کرج، ایران | ||
| 6بخش بیماری‌های طیور، موسسه تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی، کرج، ایران | ||
| چکیده [English] | ||
| طراحی و تولید صحیح و مناسب یک ساختار فیوژن؛ از مهمترین مشکلات در زمینه تولید مقادیر زیاد پروتئین های فانکشنال برخوردار از پیچ خوردگی‌های مناسب است. چنین ساختاری باید دارای کلیه اجزاء مورد نیاز یک ژن واقعی باشد. در صورتیکه ساختار فیوژن به خوبی طراحی شده باشد, می توان آن را در داخل یک میزبان مناسب کلون کرد. کلستریدیوم پرفرینجنز از عوامل مهم بیماری‌زای انسان و دام بوده و تعداد زیادی توکسین از جمله اپسیلون و بتا که مسئول بیماری های شدیدی هستند را تولید میکند. در مطالعه حاضر یک ساختار جدید شامل partial cds ژن توکسین اپسیلون کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ D و partial cds ژن توکسین بتا کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ B طراحی شد. در اولین مرحله این ژن ها با استفاده از دو جفت پرایمر آمپلیفای شده و در مرحله دوم با استفاده از پرایمرهای اپسیلون فوروارد و بتا ریورس و با بکار گرفتن قطعه AEAAAKEAAAKAبه عنوان لینکر با یکدیگر فیوز شدند. این کار بر مبنای روش fusion PCR وبا استفاده از آنزیم DNA Pfu پلیمراز که قابلیت تصحیح خطا را دارد انجام شد. قطعه فیوژن پس از اینزرت شدن در پلاسمید pJET1.2blunt در باکتری E.coli سویه TOP10 کلون شد. براساس آخرین اطلاعات موجود این مقاله اولین گزارش در خصوص طراحی و کلونینگ فیوژن ژن اپسیلون- بتا و اولین گزارش در مورد استفاده از استراتژی فیوژن واکنش زنجیره‌ای پلیمراز در کلستریدیا است که می‌تواند برای توسعه و تکوین یک واکسن نوترکیب از فیوژن پروتئین اپسیلون-بتا استفاده شود. همچنین این ساختار می تواند به عنوان مدلی برای توسعه و تکوین ساختار های جدید فیوژن پروتئین برای سایر پروتئین ها و توکسین‌های بالقوه نیز بکار گرفته شود. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| کلستریدیوم پرفرینجنس, توکسین اپسیلون, بتاتوکسین, کلونینگ, فیوژن واکنش زنجیره‌ای پلیمراز | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,082 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 3,134 |
||