تعیین هویت لاین سلولی BHK-21-C5 ایران با PCR دو مرحله ای | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| Article 3, Volume 76, Issue 2, January 0, Pages 193-201 PDF (615.75 K) | ||
| Document Type: مقالات پژوهشی | ||
| DOI: 10.22092/ari.2020.128637.1419 | ||
| Abstract | ||
| تعیین هویت لاین سلولی BHK-21-C5 موجود در ایران با استفاده از PCR دو مرحله ای چکیده فارسی تعیین هویت لاینهای سلولی حیوانی در بانکهای سلولی یکی از مهمترین برنامهها طی عملیات کشت سلول و ذخیره سازی سلول است که مستنداتی را ارائه میدهد که میتواند برای استفاده کاربردی از لاینهای سلولی حیوانی مفید باشد. بنابراین تلاشها برای جلوگیری از شناسایی نادرست سلولها، آلودگی متقاطع با لاینهای سلولی دیگر و خطا در لیبل گذاری با استفاده از روشهای مختلف ادامه دارد و اغلب منجر به ارزیابی نادرست میگردد. این آلودگیها در بسیاری از موارد غیر قابل جبران می باشد. یکی از روشهای کاربردی در این زمینه روش مولکولی است که میتواند نتایج را با دقت بیشتری نشان دهد. در این مطالعه خصوصیات BHK-21 (C5) تعیین شد و سعی شد هویت BHK-21 (C5) به عنوان یک لاین سلولی پیوسته در ایران به وسیله روش مولکولی PCR تعیین شود. در این مطالعه ژن سیتوکروم اکسیدازC (COI) به عنوان یک قطعه DNA رایج برای تعیین هویت لاین سلولی BHK-21(C5) در کنار شش لاین سلولی شامل،CHO, LK, RBK, MRC5, VERO, GL با استفاده از PCR و همچنین تکثیر هرلاین سلولی با پرایمر مخصوص خودش انتخاب شد. پس از تکثیر، محصولات PCR با ژل آگاروز الکتروفورز به منظور اطمینان از صحت آنها مورد بررسی قرار گرفت. نتایج آزمایشات نشان داد که درصد بقا حدود 92% تخمین زده شد و یک کشت سلول یک نواخت به دست آمد. زمان دو برابر شدن و نسبت μ معادل 5/20 ساعت و 03/0 بدست آمد. آزمایشات استریلیتی نشان داد که بذر سلول عاری از آلودگیهای باکتریایی، مایکوپلاسمایی و مایکوباکتریومی بود. نتایج شناسایی مولکولی این سلول نشان میدهد که تعیین هویت این لاین سلولی اثبات شده است و میتواند در تحقیقات، مطالعات تشخیصی و تولید و کنترل کیفیت فراورده های بیولوژیک مورد استفاده قرار گیرد. | ||
| Keywords | ||
| تعیین هویت; لاین سلولی BHK-21-C5- ژن سیتوکروم C اکسیداز | ||
|
Supplementary Files
|
||
| References | ||
|
Abercrombie, M., 1978. Fibroblasts. J Clin Pathol Supplement 12, 1-6.
ASN, A.T.C.C.S.D.O.W., 2010. Cell line misidentification: the beginning of the end. Nat Rev Cancer 10, 441.
Azari, S., Ahmadi, N., Tehrani, M.J., Shokri, F., 2007. Profiling and authentication of human cell lines using short tandem repeat (STR) loci: Report from the National Cell Bank of Iran. Biologicals 35, 195-202.
Cabrera, C., Cobo, F., Nieto, A., Cortés, J., Montes, R., Catalina, P., et al., 2006. Identity tests: determination of cell line cross-contamination. Cytotechnology 51, 45-50.
Cooper, J.K., Sykes, G., King, S., Cottrill, K., Ivanova, N.V., Hanner, R., et al., 2007. Species identification in cell culture: a two-pronged molecular approach. In Vitro Cell Dev Biol Anim 43, 344-351.
Cywinska, A., Hunter, F., Hebert, P.D., 2006. Identifying Canadian mosquito species through DNA barcodes. Med Vet Entomol 20, 413-424.
DeliveReD, G., 2012. Animal Cell Culture Guide. Wiley.
Drexler, H., Dirks, W., Matsuo, Y., MacLeod, R., 2003. False leukemia–lymphoma cell lines: an update on over 500 cell lines. Leukemia 17, 416-426.
Freshney, R.I., 2011. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications, Wiley.
Hebert, P.D., Cywinska, A., Ball, S.L., Dewaard, J.R., 2003. Biological identifications through DNA barcodes. Proceedings of the Royal Society of London 270, 313-321.
Hernandez, R., Brown, D.T., 2010. Growth and maintenance of baby hamster kidney (BHK) cells. Curr Protoc Microbiol 17, 1-7.
Hughes, P., Marshall, D., Reid, Y., Parkes, H., Gelber, C., 2007. The costs of using unauthenticated, over-passaged cell lines: how much more data do we need? Biotechniques 43, 575-586.
Lee, P.Y., Costumbrado, J., Hsu, C.-Y., Kim, Y.H., 2012. Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments. J Vis Exp 20, 3923.
Liu, M., Liu, H., Tang, X., Vafai, A., 2008. Rapid identification and authentication of closely related animal cell culture by polymerase chain reaction. In Vitro Cell Dev Biol Anim 44, 224-227.
Liu, M.Y., Lin, S.-C., Liu, H., Candal, F., Vafai, A., 2003. Identification and authentication of animal cell culture by polymerase chain reaction amplification and DNA sequencing. In Vitro Cell Dev Biol Anim 39, 424-427.
Masters, J.R., 2000. Human cancer cell lines: fact and fantasy. Nat Rev Mol Cell Biol 1, 233-236.
Mohammadi, A., Farzinpoor, M., Lotfi, M., Ghorbani, R., 2016. Comparative sensitivity analysis between two methods for species differentiation and interspecies cross contamination in animal cell culture. Arch Med Sci 2, 84-88.
Nema, R., Khare, S., 2012. An animal cell culture: Advance technology for modern research. Adv Biosci Biotechnol 3, 219-226.
Ono, K., Satoh, M., Yoshida, T., Ozawa, Y., Kohara, A., Takeuchi, M., et al., 2007. Species identification of animal cells by nested PCR targeted to mitochondrial DNA. In Vitro Cell Dev Biol Anim 43, 168-175.
Parodi, B., Aresu, O., Bini, D., Lorenzini, R., Schena, F., Visconti, P., et al., 2002. Species identification and confirmation of human and animal cell lines: a PCR-based method. Biotechniques 32, 432-440.
Rahikainen, A.-L., Palo, J.U., de Leeuw, W., Budowle, B., Sajantila, A., 2016. DNA quality and quantity from up to 16 years old post-mortem blood stored on FTA cards. Forensic Sci Int 261, 148-153.
Ramya, R., Nagarajan, T., Sivakumar, V., Senthilkumar, R., Obulapathi, B.B., Thiagarajan, D., et al., 2009. Identification of cross-contaminated animal cells by PCR and isoenzyme analysis. Cytotechnology 61, 81-92.
Stacey, G., 2000. Cell contamination leads to inaccurate data: we must take action now. Nature 403, 356.
Steube, K.G., Koelz, A.-L., Drexler, H.G., 2008. Identification and verification of rodent cell lines by polymerase chain reaction. Cytotechnology 56, 49-56.
Steube, K.G., Meyer, C., Uphoff, C.C., Drexler, H.G., 2003. A simple method using β-globin polymerase chain reaction for the species identification of animal cell lines—a progress report. In Vitro Cell Dev Biol Anim 39, 468-475.
Strober, W., 2015. Trypan blue exclusion test of cell viability. Curr Protoc Immunol 111, A3. B. 1-A3. B. 3.
Trivedi, S., Aloufi, A.A., Ansari, A.A., Ghosh, S.K., 2016. Role of DNA barcoding in marine biodiversity assessment and conservation: an update. Saudi J Biol Sci 23, 161-171. | ||
|
Statistics Article View: 2,469 PDF Download: 3,192 |
||