- همه نشریات
- علوم آب و خاک
- علوم اقتصاد و ترویج کشاورزی
- علوم جنگل, مرتع و آبخیزداری
- علوم دامی و شیلات
- علوم زراعی و باغی
- علوم گیاهپزشکی
- علوم مهندسی و مکانیزاسیون کشاورزی
- مجلات ترویجی کشاورزی
- نشریات انجمن ها
- نشریات با زبان انگلیسی
- نشریات با زبان فارسی
- نشریات دانشگاه آزاد اسلامی
- نشریات علمی
- نشریات علمی سازمان تحقیقات، آموزش و ترویچ کشاورزی
آمار
| تعداد نشریات | 277 |
| تعداد نشریات سازمان | 76 |
| تعداد شماره‌ها | 1,998 |
| تعداد مقالات | 22,948 |
| تعداد مشاهده مقاله | 12,268,782 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 9,939,312 |
Comparison of two different methods in the extraction of outer membrane vesicles from the Bordetella pertussis as a vaccine candidate | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقالات آماده انتشار، پذیرفته شده، انتشار آنلاین از تاریخ 24 خرداد 1399 اصل مقاله (480.84 K) | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2020.342861.1487 | ||
| نویسندگان | ||
M. S. Soltani1؛ F. Eftekhar1؛ M. Nofeli2؛ S. R. Bani Hashemi3؛ F. Shahcheraghi  4
| ||
| 1Department of Microbiology and Microbial Biotechnology, Faculty of Life Sciences and Biotechnology, Shahid Beheshti University, Tehran, Iran. | ||
| 2Department of Human Bacterial Vaccines Production and Research, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran. | ||
| 3Department of Immunology, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran. | ||
| 4Department of Bacteriology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran | ||
| چکیده | ||
| Background & Objective: Despite vaccination, pertussis is still a worldwide health problem. Outer membrane vesicles (OMVs) in gram-negative bacteria can stimulate the immune system due to several outer membrane proteins and are very good candidate in vaccine development, OMVs obtain from Bordetella pertussis contain several antigens, which are considered immunogenic that could make them a potential candidate for vaccine production. The aim of this study was to compare the current OMVs extraction method (with ultracentrifuge) and the modified extraction method (without ultracentrifuge) and to evaluate the physicochemical properties as well as the expression of their main virulence factors. Materials & Methods: Vaccinal strain BP134 were grown on Bordet Gengo agar were inoculated in Modified Stainer-Scholte medium for mass cultivation. OMVs were prepared by using two different methods. The OMVs obtained were stained and examined with a transmission electron microscope. Protein contents were measured by the Bradford method and then the protein profile evaluated by SDS-PAGE. The presence of immunogenic antigens were detected by Western blotting. Results: The size and shape of the OMVs obtained from the modified method without the use of ultracentrifuge were similar to the current method and with a size between 40 to 200 nm. The total protein yield of the OMV isolated using the current and modified method were 800 and 600 µg/ml respectively. Evaluating the protein profile of extracted OMVs, showed the presence of different proteins. Finally, the presence of PTX, PRN, and FHA in OMVs extracted from both methods was observed. Conclusions: Comparison results of two OMV extraction methods showed that the obtained vesicles have a suitable and similar shape and size as well as the expression of three important pathogenic factors as immunogens. Despite the relatively low reduction of protein yield since the modified method does not require ultracentrifuge, this extraction method can be used as a suitable alternative for extracting the outer membrane vesicles from the B. pertussis, especially in developing countries. It should be noted that further experiments, including immunogenicity determination of OMVs, obtained as vaccine candidates in animal models are required. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| B. pertussis؛ outer membrane vesicle؛ virulence factors | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| مقایسه دو روش جداسازی وزیکول‌های غشاء خارجی بردتلا پرتوسیس به عنوان کاندیدای واکسن | ||
| چکیده [English] | ||
| زمینه و هدف: علیرغم واکسیناسیون، پرتوسیس هم چنان یک معضل بهداشتی در سراسر جهان است. وزیکول‌های غشاء خارجی (OMVs) باکتری‌های گرم منفی با داشتن پروتئین‌های غشاء خارجی می توانند باعث تحریک سیستم ایمنی شده و جهت تهیه واکسن کاندیداهای بسیار مناسبی هستند. OMVهای بردتلا پرتوسیس نیز حاوی آنتی ژن هایی می‌باشد که به عنوان ایمونوژن مطرح هستند و میتوان آنها را به عنوان کاندیدای بالقوه برای تولید واکسن در نظر گرفت. هدف این مطالعه مقایسه جداسازی OMVها با روش رایج (با اولتراسانتریفیوژ) و روش تغییر یافته (بدون اولتراسانتریفیوژ) و ارزیابی خصوصیات فیزیکوشیمیایی و بیان فاکتورهای اصلی بیماری‌زایی آنها بود. مواد و روش‌کار: سویه واکسینال BP134 در محیطBordet Gengo آگار کشت داده شد و برای کشت انبوه در محیطModified Stainer-Scholte تلقیح شدند. وزیکول‌ها با استفاده از دو روش استخراج شدند. وزیکول‌های بدست آمده رنگ‌آمیزی و توسط میکروسکوپ الکترونی عبوری بررسی شدند. غلظت پروتئین با استفاده از روش برادفورد اندازه‌گیری شد و سپس پروفایل پروتئینی توسطSDS-PAGE ارزیابی گردید. حضور آنتی ژن‌های ایمونوژن با وسترن بلات تشخیص داده شد. یافته‌ها: اندازه و شکل OMVهای بدست آمده از هر دو روش مشابه و با اندازه بین 40 تا 200 نانومتر بود. بازده میزان محصول و غلظت پروتئین OMVهای به دست آمده روش رایج و تغییر یافته به ترتیب µg/ml 800 و 600 بود. ارزیابی پروفایل پروتئین OMVهای استخراج شده، وجود پروتئین‌های مختلف را نشان داد. در نهایت حضورPTX ، PRN و FHA در OMVهای استخراج شده از هر دو روش مشاهده گردید. نتیجه‌گیری: نتایج مقایسه دو روش جداسازی OMV، نشان داد که وزیکول های بدست آمده دارای شکل و اندازه مناسب و مشابه می‌باشند، همچنین بیان سه فاکتور بیماری زای مهم به عنوان ایمونوژن در هر دو روش مشاهده شد. علی رغم کاهش نسبی کم میزان بازدهی محصول در روش تغییر یافته با توجه به این که در روش تغییر یافته نیاز به اولتراسانتریفیوژ نیست، از این روش جداسازی میتوان به عنوان جایگزینی مناسب برای استخراج وزیکول های غشای خارجی بردتلا پرتوسیس به خصوص در کشورهای در حال توسعه استفاده نمود. لازم به ذکر است آزمایشات بیشتر شامل تعیین ایمنوژنسیتی OMVهای بدست آمده به عنوان کاندیدای واکسن در مدل های حیوانی مورد نیاز است. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| بردتلا پرتوسیس, وزیکول‌های غشاء خارجی, فاکتورهای بیماری‌زا | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 92 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 78 |
||
