آمار

تعداد نشریات281
تعداد نشریات سازمان80
تعداد شماره‌ها2,393
تعداد مقالات27,727
تعداد مشاهده مقاله15,421,220
تعداد دریافت فایل اصل مقاله12,231,511
Khaki, Pejvak, Rahimi Zarchi, Fatemeh, Moradi Bidhendi, Soheila, Gharakhani, Mehdi. (1399). Application of a multiplex PCR assay for Molecular Identification of pathogenic and non - pathogenic leptospires based on lipL32 and 16S rRNA genes. سامانه مدیریت نشریات علمی, (), -. doi: 10.22092/ari.2022.359211.2388
Pejvak Khaki; Fatemeh Rahimi Zarchi; Soheila Moradi Bidhendi; Mehdi Gharakhani. "Application of a multiplex PCR assay for Molecular Identification of pathogenic and non - pathogenic leptospires based on lipL32 and 16S rRNA genes". سامانه مدیریت نشریات علمی, , , 1399, -. doi: 10.22092/ari.2022.359211.2388
Khaki, Pejvak, Rahimi Zarchi, Fatemeh, Moradi Bidhendi, Soheila, Gharakhani, Mehdi. (1399). 'Application of a multiplex PCR assay for Molecular Identification of pathogenic and non - pathogenic leptospires based on lipL32 and 16S rRNA genes', سامانه مدیریت نشریات علمی, (), pp. -. doi: 10.22092/ari.2022.359211.2388
Khaki, Pejvak, Rahimi Zarchi, Fatemeh, Moradi Bidhendi, Soheila, Gharakhani, Mehdi. Application of a multiplex PCR assay for Molecular Identification of pathogenic and non - pathogenic leptospires based on lipL32 and 16S rRNA genes. سامانه مدیریت نشریات علمی, 1399; (): -. doi: 10.22092/ari.2022.359211.2388

Application of a multiplex PCR assay for Molecular Identification of pathogenic and non - pathogenic leptospires based on lipL32 and 16S rRNA genes

Archives of Razi Institute
مقالات آماده انتشار، پذیرفته شده، انتشار آنلاین از تاریخ 23 مهر 1399  XML
نوع مقاله: Original Articles
شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2022.359211.2388
نویسندگان
Pejvak Khaki email orcid 1؛ Fatemeh Rahimi Zarchi2؛ Soheila Moradi Bidhendiorcid 3؛ Mehdi Gharakhani3
1Department of Microbiology, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran.
2Department of Biology, Tehran Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
3Department of Microbiology, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
چکیده
Leptospirosis is a serious zoonotic infection and the most prevalence disease is in the tropical and subtropical region. The definitive diagnosis of Leptospirosis, caused by spirochetes of the genus Leptospira infection is already using culture methods, serological tests such as the microscopic agglutination test (MAT) and molecular detection methods (PCR) are possible. In this study, we used multiplex PCR method for detection of pathogenic and non - pathogenic Leptospira based on lipL32 and 16S rRNA genes. All serovars were obtained from the Leptospira Reference Laboratory of Microbiology Department, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran. The PCR product for the lipL32 and 16S rRNA genes was 272 bp and 240 bp respectively. The sensitivity amplification for the multiplex assay was 10-6 pg / μl for 16S rRNA gene and 10-4 pg / μl for lipL32 gene. The sensitivity for multiplex PCR was 10-3 pg / μl. The results supported the idea that multiplex PCR can be used to detect Leptospira samples. This method was also able to differentiate between saprophytic and pathogenic leptospires and was able to do so much easily than conventional methodologies. Due to the slow growth of Leptospira and the importance of time in diagnosis, molecular methods such as PCR are suggested.
کلیدواژه‌ها
Leptospira؛ 16S rRNA gene؛ lipL32 gene؛ Multiplex PCR؛ Molecular Identification
عنوان مقاله [English]
تشخیص مولکولی لپتوسپیراهای بیماری زا و غیر بیماری زا بر اساس ژن های lipL32 و 16S rRNA با استفاده از روش Multiplex PCR
چکیده [English]
لپتوسپیروز یک عفونت زئونوز است که توسط اسپیروکت بیماری زایی به نام لپتوسپیرا ایجاد میشود. جهت تشخیص زودهنگام لپتوسپیروز، تمایز گونه های بیماری زا و غیر بیماری زا از یکدیگر اهمیت ویژه ای دارد. توالی های ژن 16S rRNA برای شناسایی گونه های لپتوسپیرا مفید هستند. LipL32 یکی از مهمترین پروتئین های غشای خارجی لپتوسپیرا است که تنها در سرووارهای بیماری زا وجود دارد و فاکتور مناسبی جهت شناسایی لپتوسپیراهای بیماری زا می باشد. بنابراین هدف از انجام این پژوهش، تشخیص مولکولی لپتوسپیراهای بیماری زا و غیر بیماری زا بر اساس ژن های lipL32 و 16S rRNA با استفاده از روش Multiplex PCR می باشد.
سرووارهای بیماری زا و غیر بیماریزای لپتوسپیرا در محیط کشت اختصاصی EMJH کشت داده شدند و DNA ژنومیک آن ها تخلیص گردید. در این تحقیق از پرایمر 16S rRNA برای سرووارهای غیر بیماری زا و پرایمر lipL32 برای سرووارهای بیماری زا استفاده شد.
با توجه به داده های PCR مشخص شد که ژن 16S rRNA با سایز 240 bp فقط در سرووارهای غیر بیماری زای لپتوسپیرا حضور دارد و همچنین ژن lipL32 با سایز 272 bp نیز فقط در سرووارهای بیماری زای لپتوسپیرا وجود دارد و در سرووارهای غیر بیماری زای لپتوسپیرا مشاهده نگردید.
میزان حساسیت برای ژن 16S rRNA، 10-6 pg / μl و برای ژن lipL32، 10-4 pg / μl به دست آمد. میزان حساسیت نیز در روش Multiplex PCR 10-3 pg / μl بود.
نتایج نشان داد که یک آزمایش تشخیصی مولکولی مناسب با ویژگی و حساسیت بالا مانند Multiplex PCR و با استفاده از ژن های lipL32 و 16S rRNA جهت تشخیص و تمایز سرووارهای بیماری زا و غیر بیماری زا از یکدیگر بسیار کارآمد می باشد.
کلیدواژه‌ها [English]
لپتوسپیرا, ژن lipL32, ژن 16S rRNA, تشخیص ملکولی, Multiplex PCR
آمار
تعداد مشاهده مقاله: 22


Contact Us | Help & Support | Site Map
counter

Journal Management System. Designed by sinaweb.