- همه نشریات
- نشریات علمی سازمان تحقیقات، آموزش و ترویچ کشاورزی
- مجلات ترویجی سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی
- سایر نشریات سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی
- نشریات علمی انجمن ها
- علوم آب و خاک
- علوم اقتصاد و ترویج کشاورزی
- علوم جنگل, مرتع و آبخیزداری
- علوم دامی و شیلات
- علوم زراعی و باغی
- علوم گیاهپزشکی
- علوم مهندسی و مکانیزاسیون کشاورزی
- نشریات با زبان انگلیسی
- نشریات با زبان فارسی
- نشریات دانشگاه آزاد اسلامی
- نشریات علمی
پیوندهای مفید
اخبار و اعلانات
آمار
| تعداد نشریات | 284 |
| تعداد نشریات سازمان | 83 |
| تعداد شماره‌ها | 2,603 |
| تعداد مقالات | 29,892 |
| تعداد مشاهده مقاله | 18,737,778 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 14,160,792 |
Evaluation of specific chicken IgY antibody value developing diagnostic capture antibody ELISA kit against Foot and Mouth disease | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقالات آماده انتشار، پذیرفته شده، انتشار آنلاین از تاریخ 05 تیر 1402 | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2023.362193.2729 | ||
| نویسندگان | ||
| Zahra Ivani1؛ Mohammad mehdi Ranjbar* 2؛ Behzad Hemati3؛ Naser Harzandi4؛ Seyed Mahmoud Azimi Dezfouli5 | ||
| 1Department of Microbiology,Karaj Branch, Islamic Azad University, Karaj, Iran. | ||
| 2Foot and Mouth Disease Reference Laboratory,Razi Vaccine & Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization(AREEO),Karaj,Iran | ||
| 3Department of Microbiology, Karaj Branch, Islamic Azad University, Karaj, Iran. | ||
| 4Department of Microbiology, Karaj Branch, Islamic Azad University, Karaj, Iran | ||
| 5Foot and Mouth Disease Reference Laboratory,Razi Vaccine & Serum Research Institute,Agricultural Research, Education and Extension Organization(AREEO),Karaj,Iran | ||
| چکیده | ||
| The most preferred method for the detection of foot-and-mouth disease (FMD) viral antigen and identification of viral serotype is the ELISA. Diagnostic tests with high sensitivity is necessary both to distinguish infected vaccinated animals and disease control programs for identifying the carrier animals. To detection of FMD virus, the current strategies are mainly based on capture antibody (sandwich) ELISA test. Applying laying pullets as animal bioreactor for production specific egg yolk antibody (IgY) has increased in recent years due to its high yield, affinity, low price, and quick production turnover. In the present study, we aimed to produce a concentrated and purifies IgY polyclonal antibody to design a capture antibody ELISA kit against the FMD virus (FMDV) serotype A. At first, laying hens were immunized by inactivated FMDV serotype virus and then, on days 14, 21, and 28 following vaccination, the eggs and sera were collected and then, the IgY polyclonal antibodies were extracted and purified from the chicken egg yolk using polyethylene glycol 6000–ethanol precipitation procedure. Extracts were filtered, purified by ion exchange chromatography and dialyzed. The purified IgY concentration estimated by Bradford assay, confirmed it presents by SDS-PAGE and Western blot and also its specific immune reaction by Ouchterlony double immunodiffusion and Dot blot tests. Moreover, for achieving optimum concentration of antigen/antibody (sera) in sandwich ELISA, checkerboard titration test was setup base on indirect ELISA results. Eventually, 119 previously confirmed samples (including 80 positive and 39 negative) by both Real time PCR (quantitative PCR, qPCR) and with a commercial ELISA kit, used for evaluation of sensitivity and accuracy of our developed Capture antibody ELISA kit. In this manner, the sensitivity and specificity of our designed kit was 100% and 98%, respectively. According to this, the present developed capture ELISA kit based on IgY has high sensitivity and specificity for FMD virus detection and it could be used in future as both commercial detecting and serotyping applications. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| Foot-and-Mouth disease virus؛ IgY؛ Chicken؛ Diagnose؛ Capture ELISA kit | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| ارزیابی عملکرد آنتی بادی IgY اختصاصی مرغ در ایجاد کیت الایزا کپچر آنتی بادی تشخیصی علیه بیماری تب برفکی | ||
| چکیده [English] | ||
| برترین روش تشخیص آنتی ژن ویروس بیماری تب برفکی و شناسایی سروتیپ های ویروسی، روش الایزا می باشد. آزمایش های تشخیصی با حساسیت بالا، هم برای تشخیص حیوانات واکسینه شده آلوده و هم برنامه های کنترل بیماری برای شناسایی حیوانات ناقل ضروری هستند. برای تشخیص ویروس FMD، استراتژی‌های کنونی عمدتاً مبتنی بر آزمایش الایزای کپچر آنتی‌بادی (ساندویچ) است. استفاده از پولت های تخمگذار به عنوان بیوراکتور حیوانی برای تولید آنتی بادی اختصاصی زرده تخم مرغ ( (IgY) در سال های اخیر به دلیل عملکرد بالا، میل ترکیبی، قیمت پایین و گردش تولید سریع افزایش یافته است. در مطالعه حاضر، هدف ما تولید یک آنتی بادی پلی کلونال IgY غلیظ و خالص برای طراحی کیت الایزا آنتی بادی کپچر علیه ویروس FMD سروتیپ A بود. بر این اساس، در روزهای 14، 21 و 28 پس از واکسیناسیون، تخم‌ها و سرم‌ها جمع‌آوری شدند و سپس آنتی‌بادی‌های پلی کلونال IgY استخراج و با روش رسوب پلی‌اتیلن گلیکول 6000-اتانول از زرده تخم مرغ خالص‌سازی شدند. عصاره ها فیلتر شده و با کروماتوگرافی تبادل یونی تخلیص و دیالیز شدند. غلظت IgY خالص با روش برادفورد تخمین زده شد و با SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد و همچنین واکنش ایمنی اختصاصی آن توسط آزمایش های ایمونودیفیوژن دوگانه Ouchterlony و Dot blot تایید شد. همچنین برای دستیابی به غلظت بهینه آنتی ژن/آنتی بادی (سرم) در ساندویچ الایزا، آزمایش تیتراسیون چکربورد بر اساس نتایج غیر مستقیم الایزا تنظیم شد. در نهایت، 119 نمونه که تایید شده (شامل 80 نمونه مثبت و 39 منفی) با هر دو روش Real Time PCR ، و کیت ELISA تجاری، برای ارزیابی حساسیت و دقت کیت ELISA آنتی بادی Capture استفاده شد. بر این اساس، حساسیت و ویژگی کیت طراحی شده ما به ترتیب 100% و 98% بود. بر این اساس، کیت ELISA کپچر مبتنی بر IgY توسعه یافته ما دارای حساسیت و ویژگی بالایی برای تشخیص ویروس FMD است و می‌تواند در آینده، هم در برنامه‌های تشخیص تجاری و هم در برنامه‌های سروتیپ‌سازی مورد استفاده قرار گیرد. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| ویروس بیماری تب برفکی, IgY, جوجه, تشخیص, کیت الایزا کبچر | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 69 |
||
سامانه مدیریت نشریات علمی. قدرت گرفته از سیناوب