| تعداد نشریات | 286 |
| تعداد نشریات سازمان | 84 |
| تعداد شماره‌ها | 3,006 |
| تعداد مقالات | 33,642 |
| تعداد مشاهده مقاله | 44,577,989 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 31,631,306 |
Molecular Cloning and Expression of the Fusion (F) Gene from Newcastle Disease Virus in Escherichia coli: A Platform for Further Studies | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقالات آماده انتشار، پذیرفته شده، انتشار آنلاین از تاریخ 07 مهر 1403 اصل مقاله (513.62 K) | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2024.366451.3250 | ||
| نویسندگان | ||
| sahere parvas* 1؛ Hamid Galehdari1؛ masoudreza seifi abad shapuri2؛ Jamal Fayazi3 | ||
| 1Department of Biology, Faculty of Sciences, Shahid Chamran University of Ahvaz, Ahvaz, Iran. | ||
| 2Department of Pathobiology, School of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University of Ahvaz, Ahvaz, Iran. | ||
| 3Department of Animal Sciences, Agricultural and Natural Resources University of khuzestan, Iran | ||
| چکیده | ||
| Newcastle disease (ND), is a highly contagious viral disease, affecting most of the avian species. The fusion protein in the ND virus serves as the target for immune response. The goal of this study was to develop the DNA vaccine using a fusion gene from the Newcastle virus. A new candidate DNA vaccine against Newcastle disease virus (NDV) has been developed. This innovative vaccine uses a fusion gene that encodes immunogenic proteins derived from NDV. The hypothesis behind this approach is that the fusion gene induces a strong immune response against the virus, potentially leading to long-term immunity in vaccinated individuals. Fusion gene RNA was extracted from the Newcastle virus, amplified by the reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). After that, it was sub-cloned in the pTG-19T vector and then in expression vector pET43.1a E. coli BL21. Gene expression was induced by IPTG. The fusion protein was subjected to Sodium dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Sequencing and PCR findings confirmed the cloning of the fusion gene into the vector. Digestion results showed the target gene had been inserted in the pET43.1a plasmid, successfully. SDS-PAGE revealed a protein band of about 54.7 kDa. Analysis of the constructs in E.coli cells revealed the successful expression of gene inserts in vitro. Our results show that the fusion protein produced by pET43.1a in E. coli can be used as a DNA vaccine. However, a weak band of expressed protein was found and the fusion protein produced by pET43.1a in E. coli was not so efficient. This survey encourages researchers to do more studies for testing the produced protein as a vaccine in vivo and in vitro. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| DNA vaccine؛ NDV؛ RT-PCR؛ SDS-PAGE؛ cDNA | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| کلونینگ و بیان ژن فیوژن ویروس بیماری نیوکاسل در اشرشیا کولی : بستری برای مطالعات بیشتر | ||
| چکیده [English] | ||
| بیماری نیوکاسل (ND)، یک بیماری ویروسی بسیار مسری است که بیشتر گونه های پرندگان را تحت تاثیر قرار می دهد. پروتئین فیوژن در ویروس ND به عنوان هدف برای پاسخ ایمنی عمل می کند. هدف از این مطالعه ساخت واکسن DNA با استفاده از ژن فیوژن ویروس نیوکاسل بود. یک واکسن نامزد DNA جدید علیه ویروس بیماری نیوکاسل (NDV) ساخته شده است. این واکسن ابتکاری از یک ژن فیوژن استفاده می کند که پروتئین های ایمونوژن مشتق شده از NDV را کد می کند. فرضیه پشت این رویکرد این است که ژن فیوژن یک پاسخ ایمنی قوی در برابر ویروس ایجاد می کند که به طور بالقوه منجر به ایمنی طولانی مدت در افراد واکسینه شده می شود. RNA ژن فیوژن از ویروس نیوکاسل استخراج شد و با واکنش زنجیره‌ای پلیمراز رونویسی معکوس (RT-PCR) تکثیر شد. پس از آن در وکتور pTG-19T و سپس وکتور عدم بیان pET43.1a E. coli BL21 زیر کلون شد. بیان ژن توسط IPTG القا شد. پروتئین فیوژن تحت الکتروفورز ژل دودسیل سولفات سدیم پلی آکریل آمید (SDS-PAGE) قرار گرفت. یافته‌های توالی‌یابی و PCR کلونینگ ژن فیوژن در ناقل را تایید کرد. نتایج هضم نشان داد که ژن هدف با موفقیت در پلاسمید pET43.1a وارد شده است. SDS-PAGE یک باند پروتئینی در حدود 54.7 کیلو دالتون را نشان داد. تجزیه و تحلیل سازه ها در سلول های اشریشیاکلی بیان موفقیت آمیز درج های ژن در شرایط آزمایشگاهی را نشان داد.نتایج ما نشان می دهد که پروتئین فیوژن تولید شده توسط pET43.1a در باکتری E. coli می تواند به عنوان واکسن DNA مورد استفاده قرار گیرد. با این حال، یک نوار ضعیف از پروتئین بیان شده پیدا شد و پروتئین فیوژن تولید شده توسط pET43.1a در E. coli چندان کارآمد نبود. این نظرسنجی محققان را تشویق می کند تا مطالعات بیشتری را برای آزمایش پروتئین تولید شده به عنوان واکسن in vivo و in vitro انجام دهند. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| DNA واکسن, NDV, RT-PCR, SDS-PAGE, cDNA | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 159 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 78 |
||