| تعداد نشریات | 284 |
| تعداد نشریات سازمان | 82 |
| تعداد شماره‌ها | 3,034 |
| تعداد مقالات | 33,949 |
| تعداد مشاهده مقاله | 45,413,509 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 68,776,577 |
Cloning, Expression and Functionality evaluation of Recombinant Monoclonal antibody against VP1 capsid protein of FMD virus | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقالات آماده انتشار، اصلاح شده برای چاپ، انتشار آنلاین از تاریخ 14 بهمن 1403 اصل مقاله (520.37 K) | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2025.368226.3491 | ||
| نویسندگان | ||
| Mojgan Helalinasab1؛ Mohammad Mehdi Ranjbar* 2؛ Hadi Pourtaghi3؛ Mohammad Kazem Shahkarami2 | ||
| 1Department of Pathobiology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran. | ||
| 2Department of Human Viral Vaccines, Razi Vaccine and Serum Research Institute (RVSRI), Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran. | ||
| 3Department of Microbiology, Karaj Branch, Islamic Azad University, Karaj, Iran. | ||
| چکیده | ||
| Foot-and-Mouth Disease (FMD) is one of the most contagious viral disease with potentially devastating economic, social and environmental impacts that caused by a virus of the genus Aphthovirus, family Picornaviridae. FMD virus (FMDV) is a highly variable RNA virus, and there is little or no cross-protection between serotypes and even between different strains of the same serotype. Monoclonal antibody (Mab) has a pivotal role in detection and serotyping of FMDV in pathological specimens, and also protection evaluation against FMD after vaccination. This study explore the expression and function of an engineered recombinant single-chain variable fragment (ScFv-Mab) in Escherichia coli (E.coli) BL21 (DE3) rosetta strain. Production of recombinant Mab against FMDV in prokaryotic system is a cheap, cost effective, simple and high yield that can reduce production complexities. Designed ScFv-Mab gene ordered into pET28a (+) expression plasmid. Expressed protein purified using Ni2+-NTA resin column and quality assessed by 12% SDS-PAGE. Finally, efficiency and functionality of a ScFv- Mab confirmed by indirect sandwich (capture) ELISA. The transformed E. coli BL21 (DE3) rosetta strain induced with 0.5 mM IPTG and incubated for 12 hr at 37 ˚C. Significant protein expressed in both soluble and insoluble fractions with purity of > 90%. The concentration of purified ScFv-Mab in optimum condition calculated approximately 2.00 mg/ml by Bradford assay. By analyzing mean of negative serum and checkerboard in 1:10 dilution, 400 ngr of ScFv-Mab coated in each well. Eventually optical density (OD) of 0.3 selected as cut-off in the indirect Sandwich ELISA assay. The ELISA results showed that the ScFv-Mab fragment successfully detected serotype O of FMDV with signals of 0.3 ≥ X ≤ 1. 5 profiles at 450nm wavelength in different positive control treatments. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| FMDV؛ G- H loop؛ VP1؛ Recombinant ScFv-Mab؛ Indirect sandwich ELISA | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| کلونینگ، بیان و ارزیابی عملکرد آنتی بادی مونوکلونال نوترکیب علیه پروتئین کپسید VP1 ویروس FMD | ||
| چکیده [English] | ||
| بیماری تب برفکی (FMD) یکی از مسری ترین بیماری های ویروسی با اثرات بالقوه مخرب اقتصادی، اجتماعی و زیستی است که توسط ویروسی از جنس آفتوویروس، خانواده Picornaviridae ایجاد می شود. ویروس FMD (FMDV) یک ویروس RNA بسیار متغییر است و بین سروتیپ‌ها و حتی ساب تایپ های هر سروتایپ، حفاظت متقاطع کمی وجود داشته یا اصلاً وجود ندارد. آنتی بادی مونوکلونال (Mab) نقش مهمی در شناسایی و تعیین سروتیپ FMDV در نمونه های پاتولوژیک و همچنین ارزیابی محافظت در برابر FMD پس از واکسیناسیون را دارد. این مطالعه بیان و عملکرد یک قطعه متغیر تک زنجیره ای نوترکیب مهندسی شده (ScFv-Mab) در سویه روزتا اشریشیا کلی (E.coli) BL21 (DE3) را بررسی می کند. تولید Mab نوترکیب در برابر FMDV در سیستم پروکاریوتی مقرون به صرفه، ساده و با عملکرد بالا است که می تواند پیچیدگی های تولید را کاهش دهد. ژن ScFv-Mab طراحی شده در پلاسمید بیان pET28a (+) سفارش داده شد. پروتئین بیان شده با استفاده از ستون رزین Ni2+-NTA خالص‌سازی شد و کیفیت آن با 12% SDS-PAGE ارزیابی شد. در نهایت، کارایی و عملکرد ScFv-Mab با روش الایزای غیرمستقیم ساندویچ (گرفتن) تایید شد. سویه روزتا E. coli BL21 (DE3) ترنسفورشده، با 0.5 میلی مولار IPTG القا شد و به مدت 12 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه شد. پروتئین قابل توجهی در هر دو بخش محلول و نامحلول با خلوص بیش از 90٪ بیان شد. غلظت ScFv-Mab خالص شده در شرایط بهینه تقریباً 2 میلی گرم بر میلی لیتر با روش برادفورد محاسبه شد. با آنالیز میانگین سرم منفی و چکربوردها در رقت 1:10، 400 نانوگرم ScFv-Mab در هر چاهک پوشش داده شد. در نهایت چگالی نوری (OD) 0.3 به عنوان برش در روش Sandwich ELISA غیر مستقیم انتخاب شد. نتایج ELISA نشان داد که قطعه ScFv-Mab با موفقیت سروتیپ O - FMDV را با سیگنال‌های در محدوده بالاتر یا مساوی 0.3 و کمتر یا مساوی 1.5 در طول موج 450 نانومتر در تیمارهای مختلف کنترل مثبت شناسایی کرد. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| FMDV, لوپ G-H, VP1, ScFv-Mab نوترکیب, الایزای ساندویچ غیرمستقیم | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 137 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 146 |
||