1گروه ژنتیک و به نژادی گیاهی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه بین المللی امام خمینی(ره)، قزوین، ایران
2گروه ژنتیک و بهنژادی گیاهی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره)، قزوین، ایران
3دانشیار، گروه ژنتیک و بهنژادی گیاهی، دانشگاه بینالمللی امام خمینی، قزوین، ایران.
4مرکز تحقیقات گیاهان داروئی، دانشگاه شاهد، تهران، ایران
چکیده
سابقه و هدف: تنوع ژنتیکی مهمترین نیاز اصلاح نباتات است که ناشی از تکامل طبیعی است و یکی از مهمترین اجزای پایداری نظامهای بیولوژیک میباشد. در میان گونههای مختلف آژیلوپس، Ae. tauschiiبا بخشیدن ژنوم D به گندمهای زراعی به عنوان اصلیترین خویشاوند وحشی گندم نان معرفی شده است. هدف اصلی این پژوهش، بررسی تنوع آللی جایگاههای ریزماهواره ژنوم D در 89 توده آژیلوپس متعلق به گونه Aegilops tauschiiجمعآوری شده از مناطق مختلف ایران و کشورهای ترکیه، افغانستان، ارمنستان، سوئد و آذربایجان و بررسی کارایی 32 جفت نشانگر ریزماهواره mir-SSR در تفکیک تودههای Ae. tauschiiبرای شناسایی و استفاده در برنامههای مدیریت ژرمپلاسم و استفاده از آن در برنامههای بهنژادی بود. مواد و روشها: بذرهای 89 توده ایرانی و غیرایرانی Ae. tauschii در گلدانهای مناسب کشت گردیده و در مرحله شش برگی استخراج DNA از بافت برگ با روش CTAB انجام شد. سپس تکثیر آللها با 32 جفت آغازگر ریزماهوارهmir-SSR انجام گردید. الگوی باندی براساس حضور و عدم حضور باند و براساس اندازه آلل امتیازدهی شد. تجزیهوتحلیل آماری با استفاده از نرمافزارهایGen Alex و NTSYS انجام شد. نتایج: از 32 جفت آغازگر مورد مطالعه 31 جفت آغازگر با الگوی باندی مناسب انتخاب و در مجموع 104 آلل تولید شد که 91 آلل چند شکل بودند. تعداد آللها برای هر آغازگر از 2 تا 5 با میانگین تعداد آلل 35/3 برای هر جفت آغازگر متغیر بود. میانگین درصد چندشکلی برای آغازگرهای مورد مطالعه 91/88 محاسبه گردید. محتوای اطلاعات چند شکلی (PIC) برای آغازگرهای مختلف از 52/0 تا 95/0 با میانگین 81/0 بود. برای تعیین نشانگرهای متمایزکننده تودهها، آللهای اختصاصی برای تودههای هر گروه شناسایی شدند. در 14 جمعیت Ae. tauschii مورد مطالعه 13 آلل اختصاصی شناسایی شد که از این میان جمعیت مازندران بیشترین تعداد آلل اختصاصی را به خود اختصاص داد. تجزیه خوشهای، تودههای مورد بررسی را به 5 گروه اصلی طبقهبندی نمود، بهطوریکه این گروهبندی نتوانست 14 جمعیت مختلف را بهطور کامل از هم تفکیک کند. نتیجه گیری: نتایج نشان داد تنوع ژنتیکی بیشتری در تودههای مازندران نسبت به تودههای دیگر مشاهده شد. گروهبندی حاصل از تجزیه خوشهای بیانگر اختلاط ژنتیکی زیاد بین این جمعیتها و یا مشابه بودن شرایط جغرافیایی تودههای قرار گرفته در یک گروه است. در مجموع، نتایج حاصل نشان داد که نشانگرهای ریزماهواره mir-SSR دارای چندشکلی بالا و از قدرت تمایز مناسب بین تودهها و تبیین تنوع آللی برخوردار بودند و میتوان از آنها به عنوان آغازگرهای سودمند برای بررسی تنوع ژنتیکی در برنامههای اصلاحی و به نژادی استفاده کرد.
Investigating the allelic diversity of D genome microsatellite loci in Aegilops tauschii with mir-SSR markers
نویسندگان [English]
Nessa Nikoo1؛ Jafar Ahmadi2؛ Sedigheh Fabriki-Ourang3؛ Ali ashraf Mehrabi4
1Department of Genetics and Plant Breeding, Faculty of Agriculture and Natural Resources, Imam Khomeini International University, Qazvin, Iran.
2Department of Genetics and Plant Breeding, Imam Khomeini International University, Qazvin, Iran.
3Associate Professor, Department of Genetics & Plant Breeding, Imam Khomeini International University, Qazvin, Iran.
4Research Center of Medicinal Plants, Shahed university, Tehran, Iran
چکیده [English]
Extended Abstract Background and Objectives: Genetic diversity is crucial for plant breeding and results in natural evolution of the biological systems. Among various Aegilops species, Ae. tauschii is the primary wild relative of bread wheat, contributing the D genome to cultivated wheat. The objective of this research was to explore the allelic diversity of D genome microsatellite loci in 89 Ae. tauschii accession originated from various regions of Iran, Turkey, Afghanistan, Armenia, Sweden, and Azerbaijan and to evaluate the effectiveness of 32 pairs of mir-SSR microsatellite markers in segregating Ae. tauschii accessions for identification and use in germplasm management and breeding programs.
Methodology: Seeds from 89 Ae. tauschii accessions were sown in pots, and DNA was extracted from young leaves using the CTAB method. Allelic amplification was performed using 32 pairs of mir-SSR microsatellite primers. Band patterns were scored based on the presence/absence of bands and allele sizes. Statistical analysis was conducted using GenAlex and NTSYS software.
Results: From the 32 primer pairs studied, 31 pairs with suitable band patterns were selected, producing 104 alleles, of which 91 were polymorphic. The number of alleles per primer pairs, ranged from 2 to 5, with an average of 3.35 alleles per pair. The average percentage of polymorphism for the primers was 88.91%. The polymorphic information content (PIC) for different primer pairs ranged from 0.52 to 0.95, with an average of 0.81. Specific alleles were identified for each population, and 13 specific alleles were found in the 14 Ae. tauschii studied populations with the Mazandaran population showing the highest number of specific alleles. Cluster analysis grouped the accessions into five main clusters, although the 14 populations were not distinguishable.
Conclusion: The results demonstrated the effectiveness of mir-SSR markers in detecting polymorphisms across the studied populations, revealing high genetic diversity and differentiation, particularly in the Mazandaran population. Cluster analysis indicated significant genetic mixing or similar geographical conditions among accessions in the same group. Overall, the mir-SSR markers used in this study exhibited high polymorphism and could distinguish populations and their allelic diversity. These markers are valuable tools for investigating genetic diversity in other breeding programs.