| تعداد نشریات | 286 |
| تعداد نشریات سازمان | 84 |
| تعداد شماره‌ها | 2,944 |
| تعداد مقالات | 33,229 |
| تعداد مشاهده مقاله | 43,865,942 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 20,372,087 |
مقایسه روشهای مختلف استخراج RNA کل از سه گونه آویشن غنی از ترکیبات فنولی و متابولیتهای ثانویه | ||
| تحقیقات ژنتیک و اصلاح گیاهان مرتعی و جنگلی ایران | ||
| مقاله 2، دوره 22، شماره 1، مرداد 1393، صفحه 11-24 اصل مقاله (445.38 K) | ||
| نوع مقاله: مقاله علمی - پژوهشی | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ijrfpbgr.2014.7646 | ||
| نویسندگان | ||
| سمیه بهادر1؛ بابک ربیعی* 2؛ سید حسن حسنی کومله3 | ||
| 1دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه زراعت و اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، گیلان | ||
| 2نویسنده مسئول مکاتبات، استاد، گروه زراعت و اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، گیلان پست‌الکترونیک: rabiei@guilan.ac.ir | ||
| 3استادیار، گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، گیلان | ||
| چکیده | ||
| گیاهان دارویی منبع غنی از مواد مؤثره برای تولید فراوردههای دارویی هستند. جنس آویشن (Thymus) متعلق به خانواده نعناعیان است که بیش از 18 گونه آن در نواحی مختلف ایران پراکنش دارند. اثرات دارویی این گیاه مربوط به ترکیبات مختلف ازجمله مونوترپنهای فنولی کارواکرول و تیمول است، اما این ترکیبات فنولی و متابولیتهای ثانویه دیگر بهعنوان مشکل اصلی استخراج RNA مناسب برای تجزیه و تحلیل بیان ژن و مهندسی ژنتیک محسوب میشوند. هدف از انجام این پژوهش، مقایسه روشهای مختلف استخراج RNA و معرفی یک روش مناسب جهت استخراج RNA از سه گونه آویشن غنی از ترکیبات فنولی بود. ازاینرو، هفت دستورالعمل استخراج RNA شامل سه روش، دو کیت و دو بافر تجاری استخراج RNAاز نظر کمیت و کیفیت RNA استخراج شده، ارزیابی و مقایسه شدند. به‌منظور ارزیابی کمیت و کیفیت RNA از خواندن جذب در طول موج 260، 280 و 230 نانومتر، محاسبه نسبت جذب 280/260 و 230/260، الکتروفورز ژل آگارز، واکنشهای RT-PCR و Real-Time PCR استفاده شد. از بین روشهای مورد مطالعه، کمیت و کیفیت RNAی استخراج شده با روش فنل/ SDSنسبت به روشهای دیگر ازجمله TRIzol® برای هر سه گونه آویشن مناسبتر بود. از محاسن این روش کوتاه بودن زمان استخراج و ساخت دستی بافر اشباع با تریس بود که در گزارشهای قبلی بهشکل آماده خریداری شده است. در نهایت، روش فنل/ SDS تغییریافته برای استخراج RNAاز برگهای غنی از ترکیبات فنولی آویشن معرفی شد. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| آویشن؛ استخراج RNA؛ فنل/ SDS؛ متابولیتهای ثانویه | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| Comparison of different methods for isolating of total RNA from leaf of three Thyme species rich in secondary metabolites | ||
| نویسندگان [English] | ||
| somaye bahador1؛ babak rabiei2؛ seyed hasan hassani kumleh3 | ||
| چکیده [English] | ||
| Medicinal plants are rich sources of natural products used for production of pharmaceutical products. Thymus genus belongs to the Lamiaceae family which has more than18 different species distributed in different areas of Iran. Pharmacological effects of thyme are related to phenolic monoterpenes such as carvacrol and thymol. Despite pharmacological effects, the phenolic compounds and other secondary metabolites are major problem for isolation of high quality RNA in gene expression analysis and genetic engineering. In the present study, seven different isolation protocols were compared to extract total RNA from three Thyme species rich in phenolic secondary metabolites in terms of quality and quantity of RNA samples with respect to spectrophotometric reading, denaturing agarose gel electrophoresis, Reverse Transcription Polymerase Chain (RT-PCR) and Real Time-PCR reactions. Three methods of isolation together with two commercial buffers and two kits that were commercially available were used. Results indicated that RNA isolated bymodified SDS- phenol protocol was goodquality and quantity, where standard RNA isolation methods involving GeneJET Plant RNA Purification Mini Kit and TRIZol extraction buffers failed. Finally, we proposed a new suitable protocol for isolating RNA from Thyme leaves rich in secondary metabolites. mes areast-theme-font:minor-fareast;mso-bidi-font-family: "B Badr";mso-ansi-language:EN-US;mso-fareast-language:EN-US;mso-bidi-language: FA'>RNA مناسب برای تجزیه و تحلیل بیان ژن و مهندسی ژنتیک محسوب میشوند. هدف از انجام این پژوهش، مقایسه روشهای مختلف استخراج RNA و معرفی یک روش مناسب جهت استخراج RNA از سه گونه آویشن غنی از ترکیبات فنولی بود. ازاینرو، هفت دستورالعمل استخراج RNA شامل سه روش، دو کیت و دو بافر تجاری استخراج RNAاز نظر کمیت و کیفیت RNA استخراج شده، ارزیابی و مقایسه شدند. به‌منظور ارزیابی کمیت و کیفیت RNA از خواندن جذب در طول موج 260، 280 و 230 نانومتر، محاسبه نسبت جذب 280/260 و 230/260، الکتروفورز ژل آگارز، واکنشهای RT-PCR و Real-Time PCR استفاده شد. از بین روشهای مورد مطالعه، کمیت و کیفیت RNAی استخراج شده با روش فنل/ SDSنسبت به روشهای دیگر ازجمله TRIzol® برای هر سه گونه آویشن مناسبتر بود. از محاسن این روش کوتاه بودن زمان استخراج و ساخت دستی بافر اشباع با تریس بود که در گزارشهای قبلی بهشکل آماده خریداری شده است. در نهایت، روش فنل/ SDS تغییریافته برای استخراج RNAاز برگهای غنی از ترکیبات فنولی آویشن معرفی شد. | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 7,078 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 3,371 |
||