| تعداد نشریات | 286 |
| تعداد نشریات سازمان | 84 |
| تعداد شماره‌ها | 3,006 |
| تعداد مقالات | 33,642 |
| تعداد مشاهده مقاله | 44,578,336 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 31,648,587 |
روش تولید آنزیمهای DNA پلیمراز Taq و Pfu | ||
| تحقیقات ژنتیک و اصلاح گیاهان مرتعی و جنگلی ایران | ||
| مقاله 12، دوره 17، شماره 1، شهریور 1388، صفحه 132-138 اصل مقاله (303.15 K) | ||
| نوع مقاله: مقاله علمی - پژوهشی | ||
| نویسنده | ||
| حسین میرزایی ندوشن* | ||
| چکیده | ||
| آنزیمهای پلیمر کننده DNAی Taq و Pfu از آنزیمهای بسیار مهم در مطالعات ژنتیک مولکولی هستند و در آزمایشگاههای مولکولی در حجم زیادی مورد استفاده قرار میگیرند. این تحقیق به منظور تامین آنزیمهای یاد شده جهت آزمایشگاههای پرمصرف و یک روش ساده خالص کردن این آنزیمها از بقایای باکتری انجام گردید. ابتدا پلاسمیدهای حامل ژنهای تولید کننده آنزیمهای Taq و Pfu به طور جداگانه به نژادی از باکتری E. coli منتقل شد. باکتریهای تراریخته بر روی محیط‌کشت 2x SOB به مدت 5/4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت شده و بعد آنزیم تولید گردید، آنزیمهای مورد نظر با روش خاصی که در تحقیق حاضر ارائه گردیده استخراج و خالص سازی گردیدند. به منظور آزمون کارآیی و تعیین میزان پرکننده مورد نیاز جهت رساندن غلظت آنزیم به سطح مطلوب از ماده رنگ‌آمیزی Bradford استفاده گردید. کارآئی و خلوص آنزیمهای تولید شده در مقایسه با آنزیم تجاری موجود در آزمایشگاه در تکثیر قطعهای از DNA ژنوم گیاه آرابیدوپسیس اکوتیپ کلمبیا توسط PCR مورد تأیید قرار گرفت. بنابراین روش ارائه شده در این تحقیق برای تولید آزمایشگاهی و محلی آنزیمهایTaq و Pfu با خلوص بالا توصیه میگردد. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| آنزیم Taq؛ آنزیم Pfu؛ انتقال ژن؛ تخلیص آنزیم | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| Pilot production of Taq and Pfu DNA polymerases | ||
| نویسندگان [English] | ||
| hossein mirzaei nodoushan | ||
| چکیده [English] | ||
| Taq and Pfu DNA polymerases are two important enzymes in molecular biology studies. They are widely used in all molecular biology laboratories. Simple method of production and purification of the two enzymes is reported here to locally supply laboratories with high consumption level. Plasmids containing the Taq and Pfu genes were separately transformed to an E. coli strain. The transformed bacteria were grown on liquid 2x SOB culture medium for 4.5 hours. Bacterial cultures were induced to produce the enzymes. Extraction and purification of the enzymes was conducted as presented in this study. Bradford assay was used to determine the enzyme concentration. The activity and efficiency of Taq and Pfu enzymes produced here were compared to a commercial enzyme by amplifying a known genomic fragment of Arabidopsis thaliana ecotype Colombia. Therefore, the enzyme production method adopted in this study was efficient in producing high purity Taq and Pfu. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| Taq enzyme, Pfu enzyme, DNA polymerase, Gene transformation, Enzyme purification | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 3,629 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 1,257 |
||